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        首先是贴壁细胞衰老检测的实验步骤：

        1、吸除培养基，用PBS(或试剂盒里的细胞清洗液)洗涤细胞3遍。

        2、吸取清洗液，加入固定液室温固定细胞15min。

        3、吸去固定液，用PBS(或试剂盒里的细胞清洗液)洗涤细胞3次。

        4、吸去清洗液，加入37℃预热的染色液。37℃孵育3-16h或直至细胞呈现蓝色，可用保鲜膜封住培养皿以防止染色液的蒸发。

        5、在光学显微镜下观察和计数，呈现蓝色的细胞为衰老细胞。如果不能及时观察，可吸去染色液后加PBS置于4℃或加入封边剂封片后4℃长期保存。

        第二个就是悬浮细胞衰老检测的实验步骤：

        1、收集细胞：离心收集待测的悬浮细胞，用PBS或细胞清洗液洗涤细胞三遍。

        2、洗去清洗液：离心后吸去清洗液，加入固定液悬浮细胞，室温摇床上固定细胞15min。

        3、洗去固定液：用PBS或细胞清洗液洗涤细胞三次，再吸去清洗液。

        4、加入37℃预热的染色液至悬浮细胞，37℃孵育3-16h或直到细胞呈现蓝色。

        5、取染好色的细胞，添加到载玻片或六孔板内。

        6、在光学显微镜下观察和计数：呈现蓝色的细胞为衰老细胞。如果不能及时观察，可吸去染色液后加PBS置于4℃或加入封边剂封片后4℃长期保存

        最后就是组织切片衰老检测的操作步骤：

        1、石蜡切片先按照常规的方法进行脱蜡和水化处理，如果样本是冰冻切片可以直接进行下一步。石蜡且切片的脱蜡我们可以参考以下的脱蜡步骤：

        （1）脱蜡前。将组织切片于 60℃恒温箱中烘烤2.5h；

        （2）组织切片置于二甲苯中浸泡15 min；

        （3）更换二甲苯后再浸泡15 min；

        （4）无水乙醇中浸泡5min；

        （5）90%乙醇中浸泡5min；

        （6）80%乙醇中浸泡5min；

        （7） 70%乙醇中浸泡5min；

        2、加入适当固定液，以充分覆盖住组织为宜，室温固定细胞15minu

        3、吸去固定液，用PBS(或试剂盒里的细胞清洗液)洗涤细胞3次。

        5、在光学显微镜下观察和计数：呈现蓝色的细胞为衰老细胞。。如果不能及时观察，可吸去染色液后加PBS置于4℃或加入封边剂封片后4℃长期保存。