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        一、细胞的无菌操作环境

   在细胞培养的过程中，防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。无菌技术就像是一道屏障很大程度上保护细胞不受环境微生物的污染。无菌环境的基本要素包括：

        1、实验员穿戴好一次性帽子、口罩、手套以及实验服才能进入实验室；

        2、实验操作前，打开超净工作台紫外灯照射30-60min灭菌，后用75%酒精擦拭操作台面并打开超净工作台风扇运转通风；

        3、枪头、培养皿、离心管等常用耗材需要通过传递仓紫外消毒后进入细胞间，再拿到超净台内再行拆封使用；

        4、冰箱中取出培养基复温，将培养基以及实验室内配置的溶液试剂喷涂75%的酒精后放入超净工作台中；

        5、在打开培养箱之前，实验员的手和培养箱需要先喷涂酒精擦拭，消毒后再将细胞从培养箱中取出放置于超净工作台中。

        二、细胞无菌操作的要点

  根据操作的需求，我们将工作台划分为三个区域：分别是洁净区、操作区和污染区。

        培养基枪头、培养皿等细胞培养常用的试剂耗材放置在洁净区，酒精灯、移液枪、待处理的细胞等操作中需要用到的物品放置在操作区，打火机、记号笔、废液缸等放置在污染区。 进行操作前，需要要点燃酒精灯。我们将酒精灯火焰附近10cm范围内视为无菌区，为了保证实验过程中的无菌环境，所有的操作尽量在无菌区进行。操作时我们要注意：

        1、打开瓶盖前，需要对瓶颈、螺旋盖进行灼烧，瓶盖打开后将敞开一侧朝下放在无菌区内。瓶口敞开期间，手和其他物品不可从上方经过。移液操作尽可能迅速，操作完后立即灼烧螺旋盖消毒后盖上。

        2、移液操作时用到的枪头必须保证无菌，移液枪在使用时枪身不能碰到容器内侧，如果移液枪在使用过程中被液体污染需更换新的移液枪。

        3、无菌枪头均为一次性使用，如果在使用过程中不小心脱落，需更换新枪头。移液过程中如果有试剂不小心滴落在超净台面上，需用75%的酒精擦拭干净。

        4、废液在弃去时，需使用移液枪操作，不可直接倒入废液缸中，以防液体飞溅污染瓶口。全部操作结束后，方可盖上酒精灯盖熄灭火焰。

        5、用完的试剂用封口膜封住后，移出操作台，放回4度储存。洁净的枪头、培养皿、移液枪等可继续放置在超净台内，废液缸需清理洗净，用酒精消毒后再放回超净台。

        6、实验台面用75%酒精喷洒后再用无菌布擦拭干净，最后关闭玻璃门，打开紫外灯消毒30-60min，为下一次的实验做准备。