Jingan DNA Polymerase简称Jingan酶,是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶,是碧云天优先推荐的基因PCR克隆用酶。
Jingan酶可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时Jingan酶有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity)。另外,Jingan酶有5'至3'外切酶活性,但Jingan酶没有反转录酶活性。
由于Jingan酶有3'至5'的外切酶活性,因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低,出错率为1.6×10-6 per nt per cycle,略低于Pfu酶的2.6×10-6 per nt per cycle。
Jingan酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶,和Taq酶的扩增效率比较接近。因此Jingan酶很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。 用途:高保真PCR(high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
用Jingan酶扩增产生的PCR产物带有3'-dA overhangs,可以用于基于T载体的PCR片断克隆。
Jingan酶可以扩增长度达10kb的DNA片断,最长可以扩增长达30kb的DNA片断。通常适合扩增10kb以下的DNA片断。 活性定义:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2mM MgSO4, 10mM (NH4)2SO4, 10mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP. 纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。 酶储存溶液:20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。 10×Jingan Buffer(with Mg2+):200 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl,20 mM MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。 失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Jingan酶失活。 包装清单: