Jingan M-MuLV反转录酶(Jingan M-MuLV Reverse Transcriptase)是一种经过改造和优化的M-MuLV反转录酶。和普通的M-MuLV反转录酶相同,Jingan M-MuLV反转录酶 也是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶,可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成;同时具有Ribonuclease H(RNase H)酶活性,可以选择性剪切RNA和DNA杂合双链 中的RNA,但不剪切单链RNA或双链RNA。 特点:Jingan M-MuLV反转录酶可以合成长达13kb的cDNA,而普通的M-MuLV反转录酶仅能合成长达9kb的cDNA;Jingan M-MuLV反转录酶 的最适反应温度为42℃并且在50℃时仍然有很高活性,可以避免普通的M-MuLV反转录酶在37℃反应时的一些不足。 用途:Jingan M-MuLV反转录酶常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。Jingan M-MuLV反转录酶合成的cDNA第一条链后续可 以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。Jingan M-MuLV反转录酶也可以用于DNA探针的标记,以及通过引物延伸(primer extention)来分析RNA。 来源:本Jingan M-MuLV反转录酶由大肠杆菌表达,表达的基因为经过突变优化的编码Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase的pol基因片断。 活性定义:One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at 37℃. Enzyme activity is assayed in 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 6 mM MgCl2, 10 mM DTT, 40 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。 纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含Jingan M-MuLV反转录酶本身含有的RNase H酶活力以外的RNA酶,满足常规反转录合成cDNA第一条 链等的需要。 酶储存溶液:50 mM Tris, pH 8.3, 100mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。 Reaction Buffer(5X):250 mM Tris, pH 8.3 at 25℃, 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT。 失活或抑制:70℃孵育10分钟可以导致Jingan M-MuLV反转录酶失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对Jingan M-MuLV反转录酶有抑制作用。
本产品用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。 包装清单: